抑郁/阿尔兹海默症/帕金森

一、技术简介:

抑郁症,阿尔兹海默症症和帕金森被称为三大主要精神类疾病,目前研究此类疾病模型主要方法是建立相关的动物模型,并进行相关行为学的实验分析。

本公司经过多年摸索,成功复制动物模型,并具备常规的行为学分析系统,可很好的开展相关实验。


二、实验流程:

A.抑郁症造模及行为学检测

1.抑郁造模方法:1)糖皮质激素诱导抑郁;2)慢性不可预知温和应激 (CUMS)抑郁模型;3)慢性束缚应激(CRS)抑郁模型 

2.抑郁行为学检测方法:1)旷场实验;2)强迫游泳实验;3)糖水偏好实验;4)悬尾实验

B.帕金森造模及行为学检测

造模方法:神经毒素:6-OHDA ,MPTP

帕金森疾病动物模型评价方法:帕金森动物模型会出现震颤麻痹、肌肉僵直等外在行为学上的症状,结合脑组织病理学指标。

a. 行为学实验:游泳试验,悬挂试验,爬杆实验

b. 病理学指标:脑组织形态学(HE染色),纹状体及黑质内的神经元数量

c. 生化指标:纹状体内多巴胺定量检测,抗氧化酶活力检测

C. 阿尔兹海默症造模及行为学检测

模型简介:阿尔兹海默症(AD)属于中枢神经系统退行性疾病,除了散发型AD(sAD)外,已知APP、PSEN1和PSEN2等基因的突变会引发家族型AD(fAD)。AD的主要病理特点是细胞内由过度磷酸化的Tau蛋白异常聚集引起的神经原纤维缠结的形成和Aβ(白-amyloid peptides)多肽为核心的老年斑在前脑基底、大脑皮层和海马体中的沉积。

造模方法:SD大鼠(250-300g)均采用1%戊巴比妥钠40μg/g腹腔内注射麻醉,麻醉后继而固定于脑立体定位仪上。按照大鼠脑立体定位图谱,以前囟为零起点,前囟后3.5 mm处为穿刺点,中线右侧旁开2mm,而后牙科钻钻开颅骨,采用微量注射器自脑表面垂直进针3mm,即:(AP= -3.5 mm, ML=2.0 mm, DV=3.0 mm),双侧海马CA1区缓慢匀速注射Aβ1-40各10 μg (1 μL),留针5 min,退针后缝合伤口。一周后进行水迷宫行为学检测。

行为学检测:所有组别,于给药后21d,进行Morris水迷宫试验,试验分为定位航行实验和空间探索实验。

1. 定位航行实验:大鼠连续接受5天的训练,每天4次,每次时间间隔30min,记录下大鼠从4个入水点和入水并找到平台所需要的时间,即逃避潜伏期。4次潜伏期的平均成绩作为当日的最终结果进入到最后统计。

2. 空间探索实验:实验的第6天,撤去平台,从距离平台的最远端入水后,将大鼠放入水中,记录下30s内大鼠的游泳轨迹,并观察分析大鼠在目标象限的停留时间,以及它的穿越平台的次数。

检测指标:行为学结束后,将各组大鼠摘取全脑,冰上剥去小脑,将剩余部分左右对切,一半放入4%多聚甲醛中固定,用于病理学检测。另一半取海马用于PCR和蛋白检测。

组织病理学:1. 尼氏染色 海马组织固定后石蜡切片,进行尼氏染色,观察海马区神经细胞形态和数量。光学显微镜下,计数视野下每组大鼠同一部位的神经元数量,作统计分析。2. 免疫荧光染色:免疫荧光染色,观察海马区Aβ1-40染色情况。荧光显微镜下,计数视野下每组大鼠同一部位的阳性斑块数量,作统计分析。3. TUNEL染色 海马组织进行TUNEL染色,观察神经元凋亡情况。荧学显微镜下,计数视野下每组大鼠同一部位的阳性染色数量,作统计分析。

标志因子水平

1. RT-qPCR检测:收集海马组织,提取RNA,反转录cDNA,PCR检测caspase-3,Bcl-2和Bax的表达。

2. Western-blot检测:收集海马组织蛋白,检测active-caspase-3,Bcl-2和Bax的蛋白表达。

三、结果说明:

1. 客户提供:实验药物

2. 公司提供:动物造模、基本实验步骤、图片、数据分析结果。

3. 实验周期:30-60个工作日。


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