双荧光素酶报告基因检测

1.服务简介


荧光素酶报告基因系统是以荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase） 活性的一种报告系统。荧光素酶可以催化luciferin氧化成 oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物荧光（bioluminescence），可通过荧光测定仪设备测定luciferin氧化过程中释放的生物荧光，常应用于启动子转录活性调控及miRNA靶基因验证等方向研究。

6.png


2.服务内容

1) 验证miR同mRNA靶向互作。将待测mRNA的预测靶向序列插入报告基因载体，再共转入该miR mimics，如果萤光素酶活性下降，则提示为其靶序列。

2) 验证miR同lncRNA靶向互作。将候选的lncRNA预测靶向序列插入报告基因载体中F-Luc的3’UTR区域，检测萤光素活性。

3) 启动子结构分析。将启动子区域序列（通常2k左右）进行分段截短，或对特定位点进行突变，再分别构建入luciferase报告载体中替换启动子序列，检测其启动子活性。

4) 验证特定转录因子同其调控序列的作用。将该序列（通常为启动子区域）插入报告基因载体，同时在实验细胞中共转过表达该转录因子，可分析转录因子过表达是否提高萤光素酶活性。


3.可供选择的载体-表3

编号

可提供的载体名称

1

pGL4.17[luc2/Neo] 信号通路报告载体

2

pLuc2-hRluc(pGL4.10-hRluc) 信号通路报告载体 双荧光素酶luc2+hRluc

3

pGL3-hRluc 双荧光素酶报告基因载体同时含有萤火虫荧光luc+和海肾荧光Rluc

4

pGL3-basic 荧光素酶报告基因载体（萤火虫荧光）

5

pmirGLO，pMir-Glo circRNA 3'UTR miRNA功能研究载体，荧光素酶报告系统质粒