神奇的外泌体

细胞外囊泡主要有：凋亡小体、微囊泡、外泌体等，随着近几年大家对外泌体的不断认识和了解，外泌体逐渐走进了大家的视野，吸引了诸多科学家的注意力。

外泌体(Exosomes)是一种直径在30-200nm的微小囊泡，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。外泌体可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。研究发现，外泌体上可以检测到许多细胞表面膜蛋白，其中一些可用于癌症的早期检测、诊断和预后。

目前，外泌体的研究逐渐火热，其领域涉及了肿瘤学、分子生物学、微生物学、再生医学、中医药学、细胞生物学等主要学科。

今天我们给大家分享外泌体的提取与常规的鉴定方法，给正在做外泌体研究的你带来一些帮助。

图1.外泌体的分泌及外泌体的组成

一、外泌体的提取：

提取外泌体常用的方法有超高速离心法、试剂盒法、免疫亲和捕获法、亲和层析法、PEG 沉淀法等等，下面简单为大家分析几种常见提取方法的原理、优势与不足。

表1.外泌体的提取方法比较

超速离心法是从生物体液或细胞上清分离外泌体的金标准方法。采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。目前在国内外普遍应用的经典技术手段。

图2.超速离心机

研匠生物具备贝克曼超高速离心机，随到随分，质量有保证。

二、外泌体的鉴定：

（1）外泌体的粒径检测——NTA

  纳米颗粒跟踪分析(Nanoparticle TrackingAnalysis,NTA)是对每个颗粒的布朗运动进行追踪和分析，结合Stockes-Einstein方程式计算出纳米颗粒的流体力学直径和浓度，检测10nm-1000nm范围内的颗粒。NTA技术已被外泌体研究领域认可为外泌体表征手段之一；相较于其他表征方式，NTA技术的样本处理更简单、更能保证外泌体原始状态、检测速度更快。

研匠生物可以在3个工作日为您提供准确的分析数据。

图3.NTA分析图及检测仪器

（2）外泌体鉴定——透射电镜

双层囊膜结构(茶托状)是外泌体重要标志之一，但普通光学显微镜难以观察到此种亚显微结构。而透射电子显微镜(Transmission electron microscope,TEM)分辨率可达0.1-0.2nm，可将被观察物体放大至数百万倍，是外泌体双层囊膜超微结构观测的经典方法。

外泌体(Exosomes)是一种直径在30-200nm的微小囊泡，形态呈现多样性，大概分为9个类别依次为：单囊泡、双囊泡、多膜泡、小双层膜泡、椭圆膜泡、小管、大管、不完整的膜泡、不规则膜泡，其中在不同类别的囊泡中可以发现三个附加特征：表面具涂层的膜泡、内含纤维的膜泡、电子致密囊泡。

研匠生物通过透射电镜可以准确的确定外泌体大小及形态特征。

图4.外泌体电镜图

（3）外泌体鉴定——WB

外泌体(Exosome)主要检测指标为CD63、CD9、CD81、Tsg101、Alix、HSP70等，针对外泌体的定性检测，至少选择2-3个指标进行相关的检测。

图5.外泌体WB分析图

研匠生物免费提供抗体使用，快速高效的完成对样本的检测及分析。

（4）外泌体荧光标记

Exosome(外泌体)是由活细胞分泌小囊泡，具有典型的脂质双分子层结构；参

与细胞之间的交流，物质的运输以及正常生理过程的维持，此外还与疾病的产生有关。对分离的外泌体进行体外标记或活体示踪，有助于对外泌体的功能进行进一步的研究。目前对于外泌体的标记方法有很多种，包括亲脂性的染料和膜渗透型的化合物等。

图6.外泌体荧光标记图

研匠生物可以提供外泌体染色服务，包括亲脂性染料：PKH-67(green)/PKH-26(red)，染料可以稳定的与细胞膜脂质区结合并发出荧光，主要用于细胞体外标记、体外细胞增殖研究以及体内外的细胞失踪研究。PKH67的体内荧光半衰期为10-12天。相比于PKH-67，PKH-26具有更长的半衰期，标记在兔红细胞上的PKH26半衰期长达100天以上。特别适用于体外增殖研究以及长期的体内细胞跟踪研究。

今天的分享就到这里，下期我们会为大家带来外泌体实验过程中遇到的问题，以及注意事项，喜欢就关注我们，我们将持续为大家带来有用的实验小tips，助力你的科研。

关注不迷路，下期见啦。