什么是外泌体，外泌体的样本预处理与运输，分离与鉴定

        外泌体（Exosomes）是一种直径在30-200nm的微小囊泡，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。外泌体可携带多种蛋白质、mRNA、miRNA，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程。同时也存在于组织样本中，如脑组织、肌肉组织、脂肪组织等。

        样本预处理与运输

        为了获得高纯度的外泌体，必须确保有效去除所有的细胞碎片及其他不需要的杂质。不同的实验样本采集时需要注意的地方不一样。在初步处理后的样本需低温-80℃保存，干冰运输。

01细胞培养上清-30ml

    用无外泌体血清培养

02血浆样本-3ml

    不能用肝素抗凝管

03尿液样本-2ml

    需加抑菌剂

        外泌体分离与鉴定

        从生物体液中分离外泌体的各种方法已经被开发出来，主要根据外泌体的大小、密度、免疫特性等特点进行操作。分离出高纯度的外泌体是我们后续开展外泌体研究的关键步骤，目前差速超速离心是外泌体分离方法中公认的"金标准"，也是高分文章中首选的分离方法。

Cell culture supernatant

              ↓500 xg 10 min.

Supernatant

              ↓1,20,000 xg 20 min.

Supernatant

              ↓100,000xg 70 min.

Exosome pellet

, PBS

100,000xg 70 min. Exosome pellet

Fresh plasma

              ↓500×g 10 min.

Supernatant

              ↓20,000 xg 20 min.

Spernatant

              ↓PBS 1:10

               100000xg

               40% sucrose c.sIn.70 min

Floating exosome fraction

              ↓100000xg

               40% sucrose c.sln.70 min

Exosome pellet

              ↓PBS

               1.2 um nylon fiter

               100000xg 70 min.

Exosome pellet

Fresh plasma

              ↓500×g 10 min.

Supernatant

              ↓20,000 xg 20 min.

Spernatant

              ↓100000xg 70 min.

Exosome pellet

              ↓PBS

               100000xg 70 min.

Exosome pellet