耐药细胞株构建 - 上海研匠生物科技有限公司

NMDA是动物机体中天然存在的一种氨基酸衍生物，为哺乳动物中枢神经系统中重要的兴奋性神经递质L-谷氨酸同系物。NMDA是兴奋性氨基酸神经递质，会对神经元产生兴奋毒性。兴奋性毒性是缺血性脑损伤的最主要发病机理，失去氧气和葡萄糖供应的缺血神经元很快就会丢失ATP并产生去极化，导致突触释放神经递质谷氨酸，胞外谷氨酸的堆积导致AMPK/KA受体和NMDA受体的过度激活，钠离子和钙离子大量内流，导致一系列的代谢失调，使细胞损伤和死亡。

服务流程

（1）根据客户实验需求，制定实验方案。

（2）调整细胞状态至实验要求，将细胞消化、计数并接种

（3）待细胞长至目标状态后，根据实验需要处理细胞。

（4）加入工作浓度的NMDA溶液构建NMDA兴奋毒性损伤模型。

（5）细胞活力及功能测定。

（6）结果统计分析。

3 氧化应激模型

氧化应激是指细胞暴露于高浓度氧分子或氧的化学衍生物而引起的细胞损伤。自由基作用于生物大分子，破坏细胞结构。受ROS影响的分子靶标包括细胞核和线粒体DNA，脂质，蛋白质，钙稳态，线粒体动力学和功能，细胞结构等。许多证据表明很多脑部疾病都与氧化应激相关。

服务流程

（1）根据客户实验需求，制定实验方案。

（2）调整细胞状态至实验要求，将细胞消化、计数并接种。

（3）待细胞长至目标状态后，根据实验需要处理细胞。

（4）加入工作浓度的H2O2溶液构建氧化应激模型。

（5）细胞活力及功能测定。

（6）结果统计分析。

4 谷氨酸损伤模型

谷氨酸是中枢神经系统（CNS）中重要的神经递质之一，对神经细胞兼有兴奋和毒性作用，在细胞培养液中加入谷氨酸可模拟体内兴奋性氨基酸损伤状态。

服务流程

（1）根据客户实验需求，制定实验方案。

（2）调整细胞状态至实验要求，将细胞消化、计数并接种

（3）待细胞长至目标状态后，根据实验需要处理细胞。

（4）加入工作浓度的谷氨酸溶液构建谷氨酸损伤模型。

（5）细胞活力及功能测定。

（6）结果统计分析。

5 6-羟基多巴胺损伤模型

6-羟基多巴胺（6-OHDA)是一种化学结构与多巴胺相似的神经毒素，是常用的PD模型诱导剂之一，其通过和多巴胺竞争结合转运体而进入神经元，在细胞内部被迅速氧化形成大量活性氧物质，并攻击细胞的脂质膜结构产生神经毒性，从而模拟帕金森病中神经元发生氧化应激的病理状态。研究证明6-OHDA在大脑内能形成羟自由基并抑制线粒体的氧化呼吸链复合物I和IV，使神经元中ATP不能正常合成，选择性地损伤多巴胺能神经元。

服务流程

（1）根据客户实验需求，制定实验方案。

（2）调整细胞状态至实验要求，将细胞消化、计数并接种

（3）待细胞长至目标状态后，根据实验需要处理细胞。

（4）加入工作浓度的6-羟基多巴胺溶液构建6-羟基多巴胺损伤模型。

（5）细胞活力及功能测定。

（6）结果统计分析。

6 酒精肝模型

肝脏中执行主要肝功能的是肝实质细胞，而酒精肝是大量饮酒造成的肝实质性细胞损伤，一般用大鼠、小鼠和人肝实质细胞，采用乙醇损伤来建立酒精肝模型。

服务流程

（1）根据客户实验需求，制定实验方案。

（2）调整细胞状态至实验要求，将细胞消化、计数并接种

（3）待细胞长至目标状态后，根据实验需要处理细胞。

（4）加入工作浓度的乙醇构建酒精肝模型。

（5）细胞活力及功能测定。

（6）结果统计分析。

7 稳转肿瘤细胞株构建

外源基因在细胞中的表达可分为两大类，一类是瞬时表达，外源DNA/RNA不整合到宿主染色体中，虽然可以达到高水平的表达，但通常只持续几天；一类是稳定表达（构建稳转株），外源DNA整合到宿主细胞染色体上，使宿主细胞可长期表达目的基因。需要在瞬时转染基础上对靶细胞进行筛选或者应用高转染效率的病毒，根据不同基因载体中所含有的抗性标志选用相应的药物进行细胞传代，从而得到可稳定表达目的基因的细胞系。观察目的基因及其表达蛋白在某种细胞中的功能，可以稳定、可长期进行研究。建立稳定细胞株，基本原理是将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体被转染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含的抗性标志进行筛选。

业务流程

（1）根据客户实验需求，制定实验方案。

（2）筛选浓度测定：以10~14 天细胞全部死亡的抗生素浓度为筛选浓度。

（3）细胞接种。

（4）细胞转染（病毒、脂质体、电穿孔、FuGENE 6等）。

（5）利用质粒上含有的抗性选择进行筛选。

（6）鉴定筛选结果。