一、技术简介
成球能力是肿瘤干细胞体外鉴定的一个重要方法。其判断的是单个细胞在合适的条件培养基中自我更新的能力,一般用细胞球形成效率(Sphere Formation Efficiency, SFE)表示。对于某些肿瘤如胶质瘤和乳腺癌,它们的肿瘤干细胞在体外条件培养时相对较容易形成细胞球,而另一些上皮肿瘤如肝癌、结肠癌等则成球相对困难。
二、实验流程
为了促进细胞的成球生长,需使用低粘附的培养板防止细胞贴壁,结合使用无血清培养基(加入B27和合适浓度的生长因子等添加剂,各种肿瘤报道的不尽相同,需要参考相关文献),以及使用1%浓度的甲基纤维素(methyl cellulose)抑制细胞聚集以确保一个细胞球来源于单个细胞等,建立了一套新的方法,获得了不错的效果。目前该方法已经在多种肿瘤干细胞的研究中得到应用。
SFE的计算方法:
使用上述方法培养10-14天以后,即可计算直径大于75um的细胞球的个数。
SFE=每孔中直径大于75um的细胞球的个数 / 每孔中原始接种细胞的总数
细胞球的传代:
通常情况下,我还需要检测细胞连续传代后的自我更新能力,此时就需要进行细胞球的传代。方法是,过70μm的细胞筛收集培养10-14天后的细胞球,使用胰酶消化成单细胞,将合适数量的细胞铺入96孔板继续进一步培养10-14天,统计细胞球的个数,计算SFE。