Exosome isolation kit Plus (for Serum/Plasma) 外泌体提取试剂盒(血清/血浆)

2024-03-25 17:38
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外泌体提取试剂盒-血浆.jpg




产品名称

货号

规格

体抽提试剂盒血清/血浆

YJ04002

50ml


运输和保存方法室温


一、产品简介:

体(Exosomes)是一种直径在30-200 nm的微小囊泡,可由机体众多类型细胞释放,并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息目前外提取主要有超速离心、试剂盒提取等方法。其中超速离心分离得到外体,纯度高,可满足于后续不同实验的需求,但是仪器要求高,周期长,工作量大。

本试剂盒可以快速从血清/血浆中获得大量完整的外体颗粒,普通的实验室离心机就可以完成,提取的外适用于下游的细胞共培养、电镜分析、Western Blot、荧光定量(qPCR)和高通量测序等应用。

二、操作方法

样品预处理:

1、收集新鲜的样品,置于冰上待用;若为冻存的样品,可水浴中解冻,待完全融化后置于冰上待用。

2、血清/血浆样品转移至离心管中,4℃,3000×g 离心10 min,弃沉淀,并将上清转移至新的离心管中。

3、将转移的上清,4℃,10,000×g 离心20 min,弃沉淀,将上清液转移至新的离心管中。

体分离:

向预处理后的样品中,加入4 体积的1×PBS 充分混匀。



血清/血浆+PBS

提取试剂

200ul+800ul

200ul

1ml+4ml

1ml

5ml+20ml

5ml


2、在PBS稀释后的样品中,继续加入相应量的提取试剂;盖紧离心管盖,涡旋振荡1-2 min,放置于4℃冰箱静置2-3 h。

3、取出装有混合液的离心管,4℃,10,000×g离心60 min,弃上清,收集富含外体的沉淀。

4、用1/5体积的样本体积的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物,使其充分悬浮于PBS后,将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃,12,000×g离心2 min,弃沉淀,保留上清液,该上清液即富含外体颗粒的溶液。

6、纯化后的外体可于4℃保存3天,-80℃ 长期保存,建议对外体进行分装后保存,避免反复冻融。

三、结果展示






NTA结果显示抽提获得的外体分散性好,大小均,峰形单一,符合外体特征

透射电镜结果显示抽提获得的外呈现典型的双层囊膜结构,背景清晰。

WB结果显示抽提的表达TSG101,CD63和CD81等外体标记蛋白