Exosome isolation kit Plus (forCell Culture Media)

细胞培养上清外泌体抽提试剂盒

运输和保存方法：室温

一、产品简介：

外泌体（Exosomes）是一种直径在30-200 nm的微小囊泡，可由机体众多类型细胞释放，并广泛分布于唾液、血浆、乳汁、尿液等体液当中。Exosome携带有多种蛋白质、脂类、DNA和RNA等重要信息。目前外泌提取主要有超速离心、试剂盒提取等方法。其中超速离心分离得到外泌体，纯度高，可满足于后续不同实验的需求，但是仪器要求高，周期长，工作量大。

本试剂盒可以快速从细胞培养上清中获得大量完整的外泌体颗粒，普通的实验室离心机就可以完成，提取的外泌体适用于下游的细胞共培养、电镜、分析、Western Blot、荧光定量（qPCR）和高通量测序等应用。

二、操作方法：

样品预处理：

1、收集新鲜的样品，置于冰上待用；若为冻存的样品，可水浴中解冻，待完全融化后置于冰上待用。

2、细胞培养上清样品转移至离心管中，4℃，3000×g 离心10 min，弃沉淀，并将上清转移至新的离心管中。

外泌体分离：

1、使用前请将外泌体抽提试剂充分混匀。

2、向样品中加入1/4 倍样本体积的外泌体抽提试剂，涡旋振荡1 min，放置于4℃冰箱静置2-3 h。

3、取出装有混合液的离心管，4℃，10,000×g离心60 min，弃上清，收集富含外泌体的沉淀。

4、用100-200ul的1×PBS溶液均匀吹打离心沉淀物，使其充分悬浮于PBS后，将悬液转移至新的1.5 mL离心管中。

5、将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃，12,000×g离心2 min，弃沉淀，保留上清液，该上清液即富含外泌体颗粒的溶液。

6、纯化后的外泌体可于4℃保存3天，-80℃ 长期保存，建议对外泌体进行分装后保存，避免反复冻融。